jueves, 29 de abril de 2010

pruebas bioquimicas, medios de cultivo- agar tetrationato caldo

CBTIS 155

INTEGRANTES:
•Acosta Flores Iván Ulises
•Castillo Villarreal Cesar Manuel
•García Segura Erik Guadalupe
•Morgado Ramírez Alejandra
•Ponce Sánchez Erika
•Yepiz Quezada Arturo Adrián

Grupo: 4L2M

Mesa: No. 6

•Materia: Procesar Cultivos Bacteriológicos

•Profesor: Víctor Manuel Alfaro López


Fecha: 26 de Abril del 2010

OBJETIVO
Elaboración de un medio de cultivo especial para su uso en pruebas bioquímicas y de un medio de cultivo simple para el cultivo de bacterias de poca exigencia.

INTRODUCCION
Tetrationato Caldo.
Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento selectivo de Salmonella spp. a partir de heces, orina, alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento
El medio de cultivo contiene peptona que provee los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, y carbonato de sodio que neutraliza y absorbe metabolitos tóxicos.
La selectividad está dada por la presencia de tiosulfato de sodio, Tetrationato (generado en el medio por el agregado de la solución iodo-iodurada) y sales biliares, los cuales permiten el desarrollo de bacterias que contienen la enzima Tetrationato reductasa, como ser la Salmonella spp. e inhiben el desarrollo de la flora acompañante.
Nutritivo agar

Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso está descripto en muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas.

Fundamento
Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes.
Enterobacterias:

Son bacterias gram negativas, la mayoría bacilos, otros cocobacilos y otros pleomórficos.

No son exigentes, son de fácil cultivo.

Son oxidasa negativo (excepto Plesiomonas, que es oxidasa positivo), es decir, carecen de la enzima citocromo oxidasa.1

Son capaces de reducir nitrato en nitrito.

Son anaeróbicos facultativos.

Son fermentadores de carbohidratos en condiciones anaeróbicas con o sin la producción de gas (en especial glucosa y lactosa), y oxidadores de una amplia gama de substratos en condiciones aeróbicas.2
Muchos géneros tienen un flagelo que sirve para desplazarse, aunque algunos géneros no son móviles.

Adicional a ello, las Enterobacteriaceae no forman esporas, algunas producen toxinas y pueden ser encapsuladas y son organismos catalasa positivos.

ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO

EQUIPO DE BIOSEGURIDAD:
Guantes
Gorro
Cubre bocas
Bata

MATERIALES DE CRISTALERIA:
Matraz erlenmeyer de 200ml
Vidrio de reloj
Varilla de cristal
Vaso de precipitado 50ml
Cajas petri (6)
Tubos de ensaye (10)

EQUIPO DE APOYO:
Autoclave
Estufa
Espátula
Torundas
Papel secante
Masquintape
Papel para cubrir mesa
Mecheros de bunsen (2)
Gradilla y balanza granataria.

REACTIVO:
Medio de cultivo (agar nutritivo y tetrationato de caldo)
Agua destilada
Gas LP

AGAR NUTRITIVO

PROCEDIMIENTO:
Se lavaron todos los materiales antes de hacer uso de ellos.
Se realizaron los cálculos con la regla de 3
REGLA DE 3:
Agar nutritivo…. 23gr
Agua destilada… 50ml
Regla de 3: ……..1.15gr
Vidrio de reloj…...17.4gr

46gr………1000ml
X…………..50 ml
50x46: 2300 entre 1000: 2.3gr

Se peso el vidrio de reloj (17.4gr) y se le sumo (2.3) regla de 3, el total (18.5gr) se marco la cantidad en la balanza granataria y se procedió a vaciar el polvo en el vidrio de reloj hasta anivelarlo.

El polvo fue vaciado del vidrio de reloj al matraz erlenmeyer que contenía 50 ml de agua destilada, se procedió a mezclar con la varilla de cristal hasta no dejar grumos.
El medio ya en estado líquido se paso al fuego directo hasta que este llegue al punto de ebullición.
Una ves que llego al estado de ebullición se dejo reposar 1min.
Después taponeamos el medio con torundas de algodón, una gasa, después se metió a la autoclave para esterilizar el medio y se dejo ahí durante 15 – 20 min. a 15 libras de presión, una vez esterilizado el medio se dejo reposar unos minutos, después procedimos a vaciar el medio a las cajas petri 20ml en cada caja petri, una vez vaciado el medio en las cajas esperamos a que el medio se solidificara para poder taparlas, una vez solidificado el medio etiquetamos las cajas con: nombre del medio de cultivo, numero de mesa, grupo y fecha.



ETIQUETADO:


VACIADO:

AGAR TETRATIONATO DE CALDO

PROCEDIMIENTO:
Se lavaron todos los materiales antes de hacer uso de ellos.
Se realizaron los cálculos con la regla de 3
REGLA DE 3:
Agar Tetrationato De Caldo….46gr
Agua destilada… ……………….50ml
Regla de 3: ……………………..2.3gr
Vidrio de reloj…........................17.4gr

46gr………1000ml
X…………..50 ml
50x46: 2300 entre 1000: 2.3gr

Se peso el vidrio de reloj (17.4gr) y se le sumo (2.3) regla de 3, el total (19.7gr) se marco la cantidad en la balanza granataria y se procedió a vaciar el polvo en el vidrio de reloj hasta anivelarlo.
El polvo fue vaciado del vidrio de reloj al matraz erlenmeyer que contenía 50 ml de agua destilada, se procedió a mezclar con la varilla de cristal hasta no dejar grumos.
El medio ya en estado líquido se paso al fuego directo hasta que este llegue al punto de ebullición.
Una ves que llego al estado de ebullición se dejo reposar 1min.
Se dejo reposar unos minutos, hasta que se enfriara para después poderlo vaciar a los tubos de cristal 10ml en cada tubo, después de haber vaciado el medio a los tubos de cristal se taponearon lo tubos con torundas de algodón y se juntaron los tubos y los etiquetamos con masquen tape con: el no. De mesa, grupo. Y por ultimo pusimos masquen tape alrededor de los tubos para que no se movieran.

Estufa del laboratorio

Medios vaciados y etiquetados.

Conclusion.
Los medios de cultivo quedaron en sus respectivos resipientes para hacer uso de ellos en el momento que se requiera.

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