Practica No. 4 Elaboración de Medios de Cultivo

Practica No. 4 Elaboración de Medios de Cultivo
Caldo Urea
Diferenciación de Enterobacterias


Objetivo

Uno de los principales objetivos de esta práctica es el de conocer la elaboración de un medio de cultivo y llevarla a cabo sin las indicaciones del profesor.


Introducción
Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo en este caso el medio caldo urea.
El caldo urea se utiliza para la valoración de la producción de ureasa por algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa, peptona, urea y rojo de fenol. Las bacterias que producen ureasa a partir de la urea dan lugar al carbonato de amonio y el indicador se vuelve rojo púrpura.


Practica No 4
Elaborar Medios De Cultivo
Caldo Urea
(Diferenciación de enterobacterias)

Objetivo:
Elaboración de medios de cultivo.


Regla de tres:
Nota: Se debe realizar para la obtención de polvo reactivo que se ocupara en total. Se realiza operaciones matemáticas para tener las conversiones de gramos y mililitros a favor de las cajas o tubos.


3.87g 100ml 387
100 ÷ 46 = .4 + 18gr (vidrio de reloj)
X 2ml x 12 18.1 gr

46.44



Materiales:

Matraz Erlenmeyer
Varilla de cristal
Vidrio de reloj
Vaso de precipitado
Probeta
Mechero de bunsen
6 tubos de ensaye
Espátula
Balanza Granataria
Gradilla
Algodón
Cinta maskin teip
Cinta testigo
Gas LP




Reactivos:

-Medio Caldo Urea
-Agua Destilada
Preparación o elaboración del medio de cultivo:
-Se realiza la regla de tres para saber la cantidad del medio a utilizar
-Se preparo el matraz Erlenmeyer con 12 ml de agua destilada
-Se vacio el polvo del medio del medio ya pesado en la balanza Granataria en el matraz Erlenmeyer con 12 ml de agua destilada
-Se mezcla con la varilla de cristal hasta homogenizar, después se taponea y etiqueta.
-Se ponen los tubos de ensaye a esterilizar en la autoclave.

Peso y medida:

Vidrio de reloj: 18gr
Cantidad de medio a utilizar: 0.4 gr
Medida y volumen de líquido a utilizar:
Agua destilada: 12ml

Tiempos:

Reposo: 1 min Grados: 121º
Presión: 8 libras Minutos: 15 min




Taponamiento y etiquetado:
 Materiales:
 Gasas
 Maskin teip
 Cinta testigo
-Se utiliza un tapón hecho de gasas o algodones y cinta maskin teip y se coloca en la boca del matraz Erlenmeyer y se sella con cinta testigo, se etiqueta y se coloca en la autoclave para su esterilización.
Esterilización:
-Introducir el producto ala autoclave por 15 min o dependiendo las indicaciones mencionadas en el bote del medio de cultivo.
-Extraer de la autoclave, dejar enfriar y prepararse para el proceso de vaciado.
-Se vacía en tubos estériles.

Vaciado:
 Materiales:
 Matraz con medio de cultivo elaborado
 Mecheros
 Gas LP
 Tubos de ensaye esterilizados
Para el vaciado los tubos de ensaye deben estar en el área estéril para evitar su contaminación. Se vacio 2ml del medio a cada uno de los tubos de ensaye. Ya vaciado el en los tubos se toponean con algodón y se etiquetan todos los tubos juntos, con cinta maskin teip, y se etiquetan.



Mesa
Gr.
Nombre del
½ de cultivo. Total de gr. Por c/p o
Tubos. Cantidad
En gramos por caja o tubo.
No. De c/p o tubos Tiempos por mesa.


Mesa-2



4gr. Base Agar
Bordet Gengou
total de gramos por caja 0.48
cantidad de gramos por tubos 0.8
6 cajas.


Mesa-4
23gr. Caldo
total de gramos por caja 1.38
cantidad de gramos por tubos Selenito 0.23
cristina

6 tubos


Mesa-5
33gr Agar
Hierro
Lisina
1.98
0.33
6 tubos


Mesa-6
3.87gr Caldo
urea
0.4
2
6 tubos

Operaciones
Matemáticas.
Comentarios.

Conclusiones.

AGAR CALDO UREA

Se utiliza para la valoración de la producción de ureasa por algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa, peptona, urea y rojo de fenol. Las bacterias que producen ureasa a partir de la urea dan lugar al carbonato de amonio y el indicador se vuelve rojo púrpura. Obsérvese en la tabla de reacciones bioquímicas que solo el género Proteus da esta reacción positiva.
• Utilización de urea como fuente de carbono.
• La enzima ureasa hidroliza la urea en amoniaco y anhídrido carbónico, ante la variación del pH por la alcalinización el indicador Rojo Fenol, vira de amarillo claro a ligeramente rosado o rosa mexicano.
• Se utiliza solamente para la detección de la ureasa en especies del género Proteus.
• Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes que la bacteria muestre crecimiento no podrá determinarse con exactitud su capacidad de hidrolizar urea.
• Pero si es capaz de hidrolizar la urea, pero no utilizar el amoniaco como fuente de nitrógeno, no se produce crecimiento y puede dar un falso negativo.

Compocicion:

CALDO UREA.

Fórmula:
Ingredientes por litro.
Extracto de Levadura..................................0.1 g
Fosfato de Potasio, Monobásico.................9.1 g
Fosfato de Potasio, Dibásico.......................9.5 g
Urea, Difco...................................................20 g
Rojo de Fenol............................................0.01 g
pH final: 6.8 0.1 a 25 °C.



Conclusión

Esta práctica se puede concluir con el hecho de que nos falta más práctica y organización en la elaboración de medios de cultivo.

Bibliografía


http:// docencia.izt.uam.mx/.../Salmonella%20en%20alimentos%20Eq2.ppt
http://html.rincondelvago.com/microbiologia_8.html