COPROCULTIVO

El coprocultivo o cultivo de heces es el método es el método utilizado usualmente para la investigación de la bacterias productoras de diarrea, aunque, en realidad, solamente es capaz de detectar el agente etiológico en un 60-80% de los procesos, quedando solamente un 20% sin identificar englobados en el termino de síndrome diarreico inespecífico.
Dentro del conjunto de la flora normal hay que buscar los microorganismos patógenos eventualmente presentes. En ciertos casos, estos patógenos son abundantes y pueden suplantar casi totalmente ala flora normal, siendo fácil su detención, pero otras veces son poco numerosas y su búsqueda resulta muy, laboriosa, siendo indispensable utilizar técnicas especiales de aislamiento selectivo.
El coprocultivo rutinario va encaminada fundamentalmente ala investigación del entero patógeno más frecuente: Salmonella, shigella y campylobacter, aunque simultáneamente pueden detectarse otros patógenos como Yersinia, Vibrio, Aerononas, Staphylococcus, Candida, Pseudomonas y otras bacterias, en los mismos medios de cultivo, conviene investigar separadamente, además, otros patógenos frecuentes por otros métodos.
Un solo coprocultivo negativo no significa que ni haya enfermedad. Se recomienda realizar cuando menos tres de éstos si el cuadro clínico del paciente siguiere infección bacteriana, no obstante la presencia de un cultivo negativo presometerse a la prueba lo contactos personales del paciente para prevenir que la infección se disemine.

MATERIAL NECESARIO
• no es necesario que esté estéril, solo es preciso que esté limpio. No contendrá restos de jabones, detergentes, desinfectantes o iones metálicos.
•Recipiente estéril de boca ancha y cierre hermético para enviar la muestra. (ejemplo: frasco de urocultivos). La muestra de heces para colocar en el frasco se recoge con espátula o abatelenguas.
•Medios de transporte para heces. Se emplean solo si el envío de la muestra se demora y se solicita en laboratorio de Microbiología. Existen sistemas comerciales para bacterias. ( Cary- Blair o solución de glicerol tamponado)
OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
•Solo se procesan materias líquidas o a lo sumo pastosas.
•Si son pastosas se toma una porción del recipiente donde hayan sido emitidas y se transfieren al sistema elegido para el envío al laboratorio. Se seleccionan las partes con mucus, pus o sangre.
•En caso de heces líquidas puede utilizarse jeringa para aspirado del material fecal del recipiente en donde ha sido emitido.
•No se procesarán las muestras de materias sólidas ni contaminadas con orina.
VOLUMEN MINIMO
•Heces pastosas: muestras del tamaño de una nuez son muy adecuadas pues permiten realizar la mayoría de los estudios.
•Heces líquidas entre 5 y 10 ml.


TRANSPORTE
•Si la muestra no se envia en forma inmediata se debe refrigerar.
•Si se va a procesar en el plazo de 1 o 2 horas después de su emisión, no necesitan medio de transporte.
•En caso contrario se remiten las materias en un sistema de transporte para enteropatógenos.
•Mientras tanto mantener refrigerada las muestras, para evitar el sobrecrecimiento de la flora normal que puede enmascarar o destruir a los enteropatógenos. El frío puede afectar la viabilidad de
Shigella
spp.
•Para el estudio de toxinas de
Clostridium difficile
la muestra se puede mantener hasta 48 horas refrigerada a 4 º en la heladera.
•Es preferible enviar las muestras para estudio virológico sin medio de cultivo, pues este diluye las partículas virales disminuyendo la sensibilidad. Si su envío se retrasa mucho utilizar medio de transporte y recipientes colocados en hielo.

OBSERVACIONES
•Las muestras para coprocultivo, deberán tomarse antes de la administración de antimicrobianos y preferiblemente antes de tomar antidiarreicos.
•Indicar siempre el juicio diagnóstico de presunción y si el paciente es menor de un año.
•Solicitar las investigaciones especiales explícitamente (C. difficile, C. perfringens, S. aureus,etc)
•En el caso de búsqueda de portadores de Salmonella , se deberá fundamentar adecuadamente el pedido y se necesitan 3 muestras negativas para asegurar que el paciente no es portador.

Procedimiento

Para realizar el examen se emplean heces que no tengan más de media hora de obtenidas, o muestras tomadas directamente del recto con un hisopo de algodón. Cuando las siembras no se pueden efectuar de inmediato o la muestra demora en llegar al laboratorio, se aconseja emulsionar aproximadamente 1g de heces en 1º ml de un líquido conservador, o bien, depositar en éste el hisopo rectal.
El líquido o solución conservadora se prepara de la siguiente manera:
NaCl 4.2 g
K2HPO4 3.1 g
KH2PO4 1.0 g
Glicerol 300 ml
H2O 700 ml
Este líquido, al que se le añade rojo fenol, se distribuye en tubos, que se esterilizan en autoclave durante 20 minutos a 120° C. Las muestras tomadas mediante hisopado rectal pueden ser portadas en tubos que contengan medio de Cary-Blair, colocando el hisopo en su interior.
Medios de cultivo
Para facilitar el aislamiento de bacterias entéricas patógenas se utilizan medios de enriquecimiento y medios selectivos. Los más empleados son los siguientes:

Medios de enriquecimiento
• Caldo con tetrationato (Mueller y Kauffmann). Este método posee la propiedad de inhibir o destruir el crecimiento de Salmonella yShigella. Contiene, entre otros, tiosulfato de sodio, sales biliares y yodo, el cuál actúa sobre el medio para determinados géneros, en especial Salmonella; de aquí su uso como paso previo a la siembra en placas de medios selectivos.
• Caldo con selenito (Leifson). Posee selenito, ácido de sodio que inhibe parcialmente al grupo coliforme durante las primeras horas de cultivo (12 a 24 horas), y permite el rápido desarrollo de salmonelas y shigellas.
Selenito sódico 4 g
Peptona 5 g
Manitol 4 g
Fosfato disódico anhidro (Na2HPO4 ) 10 g
Agua destilada 1000 ml

Medios selectivos

• Agar SS (salmonella-shigella). Este medio selectivo, empleado para aislar Salmonella y Shigella ejerce una buena inhibición sobre agentes coliformes, sin limitar el desarrollo de los patógenos gramnegativos. Se utiliza especialmente junto al agar-sulfito de bismuto, para siembra de materiales provenientes de medios enriquecedores, como caldo tetrationato y caldo con selenito. Contiene sales biliares, lactosa, citrato y tiosulfato sódico, citrato férrico, verde brillante y rojo neutro como indicador. Shigella y Salmonella, como también otros agentes que no fermentan la lactosa, aparecen como colonias lisas, transparentes a opacas; las pocas colonias fermentadoras de la lactosa que se pueden desarrollar tienen color rojo y un centro negro. Conviene señalar que la bilis o las sales biliares inhiben el crecimiento de microorganismos grampositivos y esporulados sin interferir en el crecimiento de los bacilos gramnegativos.
• Agar MacConkey. Es un medio selectivo-diferencial que contiene sales biliares, las cuales inhiben la flora grampositiva. Los agentes del grupo coliforme dan colonias de color rojo, debido a que fermentan la lactosa. En cambio, Salmonella y Shigella sp. forman colonias incoloras.
• Agar XLD (Xilosa-Lisina-Desoxicolato). Medio indefinido, mixto, sólido y diferencial. En él crecerán microorganismos quimioheterótrofos formadores de sulfhídrico a partir de sulfato. En la receta aparece rojo fenol, en el cual actúa el indicador de pH.
Se pueden presentar tres tipos de anomalías intestinales:
• Infección intestinal ! Debida a la producción de cambios ecológicos por la acción directa del microorganismo.
• Intoxicación alimentaria ! Producida indirectamente por el microorganismo a través de la producción de toxinas, antes de la ingestión por la persona.
• Toxiinfeción alimentaria ! Producida por el microorganismo a través de la producción de toxinas, después de su ingestión por la persona.
Hay que tener en cuenta la biota presente en condiciones normales. Así:
• Lactantes (alimentación materna).
Altos niveles de Bifidobacterium
Bajos niveles de E.coli y Enterobacterias
• Lactantes (alimentación artificial)
Altos niveles de grampositivos
Bajos niveles de Bifidobacterium

• Niños y adultos
Predominancia de Anaerobios
Anaerobios Facultativos y Aerobios:
% E.coli " 80%
% Enterococos " 14%
% Staphylococcus y Streptococcus " 4%
% Otros " 2%
" Dieta rica en proteínas: predominancia de biota Grampositiva.
" Dieta rica en hidratos de carbono: predominio de Gramnegativa.



TOMA Y OBSERVACIÓN DE MUESTRAS
Una vez tomada la muestra como se mencionó anteriormente procedemos a la observación de la muestra. Ésta ha de hacerse a dos niveles:
• Macroscópicamente.
Se comprueba su olor, consistencia, presencia de mucus, sangre, restos de alimentos sin digerir.
• Microscópicamente.
Sometemos la muestra a una tinción simple con azul de metileno. Esto nos permite comprobar la presencia o ausencia de leucocitos. Así:
" presencia de leucocitos ! la infección ha cursado con inflamación intestinal. Se trata por tanto de microorganismos invasivos como Salmonella, Shigella o ETEC.
" ausencia de leucocitos ! significa que no ha habido inflamación por lo que la infección puede ser debida a virus (Rotavirus) o a bacterias productoras de toxinas (Vibrio cholerae).

RESULTADOS

Examen macroscópico
• color marrón claro
• olor normal
• consistencia intermedia
• pocos restos de alimentos
• ausencia de sangre
• ausencia de mucus