Tinciones

Tinción De Gram

La tinción de gram o coloración de gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en 1884. se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y bacteria gram negativa a las que se visualizan de color rosa.

Técnica

• Preparar el frotis y fijarlo al calor
• Colocar la preparación fijada con la solución de cristal violeta durante l’
• Lavar con solución yodada (Lugol )
• Cubrir el frotis con Lugol durante 1’
• Escurrir y decolorar por alcohol hasta que no arrastre más cristal violeta.
• Lavar con agua
• Contrastar con la solución de fucsina por 1’
• Lavar con agua, secar al aire y examinar con objetivo de inmersión

Bacterias Gram Positivas

• En microbiología, se denominan bacterias Gram positivas a aquellas bacterias que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de aquí el nombre de "Gram-positivas" o también "grampositivas". Esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, y cuando se tratan como taxón se utiliza también el nombre de Posibacteria.




• La envoltura celular de las bacterias Gram-positivas comprende la membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de peptidoglucano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram, Bacterias Clostridium perfringens (Gram positivas).

Bacterias Gram Negativas

• Las Bacterias Gram-Negativas son aquellas que presentan dos membranas lipídicas y entre ellas se localiza un fina pared celular compuesta fundamentalmente por peptidoglucano ( al ser fina esta pared, no se tiñe de violeta o azul en la tinción ).


• Estas bacterias se tiñen de Rosa.
  
• Muchas especies de bacterias Gram-negativas causan enfermedades. Los cocos Gram-negativos causan la gonorrea (Neisseria gonorrhoeae), meningitis(Neisseria meningitidis) y síntomas respiratorios (Moraxella catarrhalis), entre otros. Los bacilos Gram-negativos incluyen un gran número de especies. Algunos de ellos causan principalmente enfermedades respiratorias (Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa), enfermedades urinarias (Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae, Serratia marcescens) y enfermedades gastrointestinales (Helicobacter pylori, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi). Otros están asociadas a infecciones nosocomiales (Acinetobacter baumanii.


• Bacterias Escherichia coli (Gram negativas) vistas al microscopio tras ser teñidas con la tinción de Gram

Tinción De Ziehl Neelsen

• La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, para la identificación de microorganismos patógenos, por ejemplo M. tuberculosis.



• Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 -1894), un patólogo.


• Las paredes celulares de ciertos parásitos y bacterias. Contienen ácidos grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (50 a 90 átomos de carbono) que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos. Por esto se denominan ácido-alcohol resistente. Las mico bacterias como M. tuberculosis y M. marinum y los parásitos coccídeos como Cryptosporidium se caracterizan por sus propiedades de ácido-alcohol resistencia. La coloración clásica de Ziehl Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras.


• Se ha desarrollado una coloración de ácido-alcohol resistencia modificada que diferencia las especies de Nocardia (bacterias ramificadas filamentosas cuyas paredes celulares contienen ácidos-grasos de unos 50 átomos de carbono), de los actinomiceos (muy semejantes pero no ácido-alcohol resistentes). Nocardia spp son decoloradas por la mezcla ácido-alcohol estándar pero no por un tratamiento más suave con ácido sulfúrico 0,5 a 1%. Estos microorganismos se denominan ácido-alcohol resistentes parciales o débiles.


• El frotis se tiñe durante unos 5 min. con Carbol fucsina aplicando calor suave. Lavar con agua. Decolorar con alcohol etílico 95% con un 3% de ClH concentrado. Lavar y teñir durante 30-60 seg. Con Azul de Metileno (color de contraste). Lavar y secar

Técnica

• Cubrir la lamina previa fijación de la preparación por calor con la fucsina fenicada de Ziehl Neelsen y calentarla hasta que emita vapores, sin que hierva, durante tres a cinco minutos, respondiendo constantemente el colorante para evitar la desecación.


• Lavar con agua corriente.
• Decolorar con el alcohol-ácido hasta que no haya más salida de color.
• Lavar con agua corriente.
• Contra teñir con la solución de azul de metileno por un minuto.
• Lavar con agua, secar al aire y observar por inmersión.
  
• Puede utilizarse en lugar de la Carbo fucsina de Ziehl – Neelsen la de Kinyoun, en cuyo caso no es necesario el calentamiento.

Composición :
– Fucsina básica..... 4 g
– Fenol.................... 8 ml
– Alcohol etílico de 95°....................... 20 ml
– Agua destilada... l00 ml

• Los microorganismos pertenecientes al género Mycobacterium son designados acidorresistentes a causa de que una vez teñidos por un método conveniente retienen el colorante y no son decolorados por acción de los ácidos. Los gérmenes acidorresistentes (bacilos de la tuberculosis y de la lepra) aparecen de color rojo y los no acidorresistentes de azul, al igual que las células, leucocitos, etc. Del material en estudio.

Tinciones:
— Tinción negativa o TINTA CHINA
— Tinción de AZUL DE METILENO
— Tinción WRITE

Tinción Negativa o Tinta China
La tinción negativa es el reverso del procedimiento de tinción usual: las células se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células.

La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal). La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.

Tinción de Azul de Metileno
Azul de metileno
† Tinción positiva.
† Permite teñir el interior celular.
† Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos).
† Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos.
† Algunas estructuras, como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.

Tinción de Wright
Es un método habitual para el examen de frotis sanguíneos, cortes histológicos y otro tipo de muestras biológicas. Este método tiene utilidad sobre todo para poner de manifiesto las ricketsias localizadas dentro de la célula huéspedes. La coloración se emplea también para teñir frotis de sangre en el examen para protozoos. Se puede emplear, como variaciones, otras coloraciones como es la técnica de citoconcentración para parásitos sanguíneos, la cual tiene un bajo coste y ofrece la posibilidad de aislar e identificar en el mismo sedimento el parásito principal, con excepción de los trofozoitos jóvenes y el plasmodium falciparum. Este método de tinción permite también la tinción diferencial de zonas con un alto contenido de ADN, y concretamente de uniones A-T. Esto permite distinguir perfectamente en microscopio óptico el núcleo celular, los cromosomas durante la mitosis, y en algunos casos, incluso el ADN mitocondrial (kinetoplasto de algunos protozoos, como Trypanosoma). Los cromosomas pueden ser tratados con varios compuestos químicos que producen la alternancia de bandas claras y oscuras a lo largo de los cromosomas. Cada cromosoma tiene un patrón de bandas característico, permitiendo que aberraciones estructurales como borrados, duplicaciones o sutiles translocaciones sean detectadas, al igual que permite la identificación de cromosomas marcadores.